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                   MTT實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)

一、MTT實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)（提供完整mtt實(shí)驗(yàn)步驟，mtt實(shí)驗(yàn)方法）
　　MTT方法簡(jiǎn)介：
　　四甲基偶氮唑鹽比色法（MTT方法），是通過快速簡(jiǎn)便的顏色反應(yīng)來檢測(cè)細(xì)胞存活數(shù)量。其原理是MTT可作為哺乳類動(dòng)物細(xì)胞線粒體中琥珀酸脫氫酶的底物。當(dāng)有活細(xì)胞存在時(shí)，線粒體內(nèi)琥珀酸脫氫酶可將淡黃色的MTT還原成藍(lán)紫色的針狀甲月替（Formazan）結(jié)晶并沉積在細(xì)胞中，結(jié)晶物能被二甲基亞砜（DMSO）溶解，用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀在570nm波長(zhǎng)處測(cè)定其吸光度OD值，OD值的高低可間接反映活細(xì)胞的數(shù)量及其活性。

　　目前MTT法常用于以下幾個(gè)方面的研究：
　　1、檢測(cè)細(xì)胞活性：常作為細(xì)胞毒性試驗(yàn)的一種方法。
　　2、體外藥物敏感實(shí)驗(yàn)：該方法簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)、快速，重復(fù)性好，所需的細(xì)胞數(shù)較少，沒有放射性，目前廣泛的用于臨床前的抗癌藥物的篩選研究。
　　3、一些細(xì)胞因子活性的研究
　　主要實(shí)驗(yàn)步驟如下：
　　1）將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞用胰酶消化后配制成濃度為1-10×104個(gè)／ml的細(xì)胞懸液，按1000-10000個(gè)細(xì)胞／孔接種于96孔板，每孔加100μl。
　　2）將平板置37℃、5％CO2濕度培養(yǎng)箱中24小時(shí)后，加入含有不同濃度受試樣本的培養(yǎng)液100μl，每個(gè)樣本不同濃度設(shè)平行的三個(gè)孔，對(duì)照組加不含樣本的培養(yǎng)液100μl，再放入培養(yǎng)箱中孵育24-72小時(shí)，
　　3）用快速翻板法倒掉培養(yǎng)液，每孔加入用無(wú)血清1640按5mg／ml新鮮配制的MTT溶液100μl，溫育4小時(shí)，使MTT還原為甲月替，再次倒掉上清液，每孔加DMSO（二甲基亞楓）200μl，用平板搖床搖勻后，使用酶標(biāo)儀測(cè)定光密度值（OD）（參考波長(zhǎng)450nm，檢測(cè)波長(zhǎng)570nm），以溶劑對(duì)照處理細(xì)胞為對(duì)照組，按下述公式計(jì)算化合物對(duì)細(xì)胞的抑制率，并按中效方程計(jì)算半數(shù)抑制濃度IC50。

　　客戶方需提供：
　　樣本描述，相關(guān)的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)內(nèi)容如作用時(shí)間和樣本濃度等。 
　　公司方提供：
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果IC50值。
　　實(shí)驗(yàn)周期與費(fèi)用：
　　實(shí)驗(yàn)費(fèi)用以樣本數(shù)和細(xì)胞株的種類數(shù)目為單位計(jì)算，實(shí)驗(yàn)周期為20個(gè)工作日，公司將在材料和預(yù)付的實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi)全部到位的工作日后30個(gè)工作日之內(nèi)提交實(shí)驗(yàn)結(jié)果。